是的。
1)样本制备中的问题:跑胶本⾝会有蛋⽩轻微的交叉污染,蛋⽩条带的扩散等;质谱检测灵敏度很⾼,对于出现上述交叉污染的蛋⽩,即使含量较低,也会被检测到;
2)测到的肽段匹配到蛋⽩上。由于不同的蛋⽩会出现部分序列相似的情况,那么该肽段同时也存在并可能匹配到其他蛋⽩上,所 以就会有⾮客户⽬标分⼦量的蛋⽩。建议:由于客户切割的蛋⽩为某⼀分⼦量范围,所以该分⼦量范围内的蛋⽩含量是相对⽐较⾼的。可以通过先对蛋⽩相对定量值进⾏排序(由⼤到⼩),然后再按照此排序,找客⼾需要分⼦量范围的蛋⽩。
对照组和处理组实验设计是否有问题,基因敲除是否⼲净,是否有补偿调控等等;样本跑胶时出现了不同程度的污染,泳道之间也会有残留,此类污染到的蛋⽩定量值应该偏低。
(1)pH值2-3的⽢氨酸buffer洗脱,⾮氧化还原反应;
(2)加⼊loading buffer煮沸;
(3)小肽竞争结合,⼀般适⽤于标签蛋⽩的IP富集。
合并搜库:是指客⼾的样本上机结束后,所有样本的下机数据数据进行合并搜库,搜库完成后,所有的样本数据会展⽰在同一张表里,出⼀份结题报告;
优点:数据合并搜库,搜库的定量数据均⼀性好,系统误差小,便于客⼾将不同样本进⾏⽐较分析其的表达量情况;
缺点:所有的样本数据会展⽰在同⼀张表⾥(鉴定结果及功能注释结果都放在⼀起展⽰),不便于客⼾单独查看每个样本的蛋⽩情况,比如覆盖度或者unique肽段情况(即数据不好拆);
分开搜库:是指客⼾的样本上机结束后,所有样本的下机数据数据单独搜库,搜库结束后,且会单独出结题报告。不同的样本的数据会放在不同的表中进⾏结果展⽰;
优点:每个样本都有⾃⼰单独的鉴定的结果⽂件,便于客⼾单独查看每个样本的蛋⽩情况;缺点:⽆法对不同的样本进⾏⽐较分析,因为分开搜库的样本数据之间⽆法对不同样本进⾏均⼀化处理,无法放在⼀起分析;
建议:10个样本以下分开搜库;10个样本以上的样本合并搜库,合并分析(节省⽣产成本)。
可以,若蛋⽩含量太低可以送多个胶条,但是胶条太⼤会增加实验成本,需要额外收费。
质谱的灵敏度⾮常⾼,实验环境中会有⽆法避免蛋白的污染,当样本中⽬标蛋⽩含量较低时杂质蛋⽩就凸显出来,通常为⻆蛋⽩污染,⼀般建议删掉杂质蛋白即可。