PRM可对⽬标蛋⽩质、⽬标肽段(如发⽣翻译后修饰的肽段)进⾏选择性检测,从而实现对⽬标蛋⽩质/肽段的靶向验证和相对或绝对定量。⽤于⼴筛之后的验证实验。
PRM技术是在多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)技术的基础上演化而来的 。 它基于⾼分辨 、⾼精度质谱(如Orbitrap系列),⾸先利⽤四级杆质量分析器的选择检测能力 ,在 一级质谱中选择性地检测⽬标肽段的⺟离⼦信息; 随后在collision cell中对⺟离⼦进⾏碎裂; 最后利⽤高分辨 、⾼质量精度分析器在⼆级质谱中检测所选择的⺟离⼦窗⼝内的所有碎⽚的信息。
两者都可⽤于差异较⼤的样本(不同物种、不同组织部位),“有无”蛋白比较,不需要同位素标记,成本相对低;样本不受限制,应⽤范围⼴;
LFQ确定是数据重复性稍差,缺失值较多;
全息扫描DIA的重现性较高,所有离⼦信息都能采集,缺点是需要预先建⽴数据库,数据分析较LFQ复杂。
DIA是全息扫描模式,能全⾯记录样本信息,定量准确性大大提高,重复性好,缺失值少,样本采集时加⼊了保留时间校正同位素肽段,适合⼤样本量,上机时间间隔可以较大,数据可回溯。可⽤于不同因素影响下的差异蛋⽩筛选,不同组织蛋⽩表图谱绘制,疾病分型等等。
DIA技术是相较于传统DDA技术而⾔的,传统的DDA技术依赖于⼀级母离子的峰强度,选择信号排名在前⼏位的另外,DIA技术将质谱整个全扫描范围分为若⼲个窗口,对每个窗口中的所有离子进⾏选择、碎裂、检测,从而无遗漏、无差异地获得样本中所有离子的全部碎片信息。
虽然DIA定量能力出色,但毕竟是非靶技术,结果最终还需要进⾏靶向验证。但DIA的⾼准确性,能够使后续靶向验证的衔接性、⼀致性更高。从某种程度上来说,DIA实现了筛选与初步验证的合⼆为⼀。
DIA定量原理与靶向技术相似,都是采⽤二级碎片离子进行定量。