蛋⽩质组(Proteome)⼀词源于蛋⽩质(protein)与基因组(genome)两个词的组合,意指“⼀种基因组所表达的全套蛋⽩质”,即包括⼀种细胞乃⾄⼀种⽣物所表达的全部蛋⽩质。蛋⽩质组与转录组有许多相似之处,也具有时空特异性,会随着环境、组织或个体的改变⽽改变。
IP(免疫沉淀):是利⽤抗原抗体特异性反应纯化富集⽬的蛋⽩的⼀种⽅法。
co-IP(免疫共沉淀):可对两种已知蛋⽩是否存在相互作⽤进⾏验证,也可以验证在总蛋⽩中是否含有与已知蛋⽩相互作⽤的未知蛋⽩。
Pulldown:带标签的诱饵蛋⽩能被特异结合该标签的固相亲和配基捕获,形成“次级亲和⽀持物”,⽤于纯化与诱饵蛋⽩相互作⽤的其他蛋⽩。可⽤来证明两种已知蛋⽩间存在的相互作⽤或寻找与已知蛋⽩直接发⽣相互作⽤的未知分⼦。
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蛋⽩质组学本质上指的是在⼤规模⽔平上研究蛋⽩质的特征,包括蛋⽩质的表达⽔平,亚细胞定位,翻译后的修饰,蛋⽩与蛋⽩相互作⽤等,由此获得蛋⽩质⽔平上的关于疾病发⽣、细胞代谢、⽣⻓发育以及各种胁迫反应等过程的整体⽽全⾯的认识。
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Western Blot采⽤的是聚丙烯酰胺疑胶电泳,待检测物是蛋⽩质,“探针”是抗体,“显⾊”⽤标记的⼆抗。SDS-PAGE可对蛋⽩质样品进⾏分离,转移到固相载体,例如硝酸纤维素薄膜(NC)上。固相载体可以吸附蛋⽩质,并保持电泳分离的多肽类型及其⽣物学活性 变。转移后的NC膜就称为⼀个印迹(blot)。⽤蛋⽩溶液(如5%BSA)处理,封闭NC膜上的疏⽔结合位点。⽤⽬标蛋⽩的抗体(⼀抗)处理NC膜(只有待研究的蛋⽩质才能与ー抗特异结合形成抗原抗体复合物),这样清洗除去未结合的⼀抗后,只有在⽬标蛋⽩的位置上结合着⼀抗。⽤⼀抗处理过的NC膜再⽤标记的⼆抗处理(⼆抗是指⼀抗的抗体),处理后,带有标记的形成抗体复合物可以指⽰⼀抗的位置,即是待研究的蛋⽩质的位置。
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