⽬前我公司可以接受细胞总数⼤于200个的样本。样本类型只承接细胞,需要客户将组织酶解成细胞后送样。
糖基化修饰主要发生在内质网和高尔基体。主要过程是将糖基在糖基转移酶作⽤下将糖链转移至蛋白质 ,和蛋白质上的氨基酸残基形成糖苷键。修饰位点:O-糖基化修饰位点:S、T、K;N-糖
基化修饰位点:N。
富集方法:利用HILIC富集。
蛋白质甲基化修饰(Methylation)是表观遗传学的重要研究内容之⼀。甲基化多发⽣在转录因⼦和核蛋⽩质上,也有少量胞质蛋白会发⽣。修饰发⽣位点:K/R。精氨酸甲基化参与转录调控,介导DNA损伤修复。赖氨酸甲基化可调控组蛋⽩功能,参与基因转录的表现调控。
利⽤CST公司针对不同甲基化位点和修饰形式的基序抗体对甲基化肽段富集后,再⽤LC-MS/MS分析,实现⼤规模甲基化蛋⽩质定性定量分析。
蛋⽩质酰基化是⼀种特殊的蛋⽩翻译后修饰,其修饰基团的供体由体内代谢途径的中间产物,如乙酰化修饰的乙酰基是乙酰辅酶A提供。
修饰发⽣位点:K。
样品经Trypsin酶切,本公司采⽤商品化试剂盒乙酰化特异性抗体进行乙酰化肽段的富集。
泛素化是指泛素(⼀类低分⼦量的蛋⽩质)分⼦在⼀系列特殊的酶作用下,将细胞内的蛋白质分类,从中选出靶蛋⽩分⼦,并对靶蛋⽩进⾏特异性修饰的过程。发⽣位点:K。
泛素化参与了细胞周期、增殖、凋亡、分化、转移、基因表达、转录调节、信号传递、损伤修复、炎症免疫等⼏乎⼀切⽣命活动的调控,与肿瘤、心血管等疾病的发病密切相关。
⼆⽢氨酰赖氨酸抗体富集:能够特异性识别Gly-Gly-ε-Lys结构域的抗体,⽤于富集泛素化信号肽,⼴泛⽤于泛素化修饰组学分析。
磷酸化是⼀种常⻅的可逆的翻译后修饰,在细胞信号传导等众多的⽣物过程中发挥调节作⽤,修饰常常发⽣在S、T、Y位点上;研究信号转导、细胞周期、⽣⻓发育以及癌症机理等⽅向会⽤到;富集方法:TiO2富集,固相金属亲和色谱IMAC富集,pY-1000基序抗体富集我们公司采⽤具有顺磁特性的孔琼脂糖Tio2磁珠作为⼯具,对模型样品和复杂样品中的磷酸肽进⾏富集。
判断修饰位点的⼯作都是由软件搜库时⼀次性完成的,搜结果中会给出修饰位点。
原理⼀般如下,质谱打到肽段,判断某个地⽅是否发⽣磷酸化修饰,就是看某个肽段是否多了80Da的分⼦量,⼀般发⽣磷酸化是STY三个点,如果⼀个肽段例如VAMEKKTK,整个肽段就是多了80Da,不同碎⽚离⼦的分⼦量变化也能与这个位点相对应,所以就会判定磷酸化修饰就发⽣在了T这个位点上 ,因此判定这个位点发⽣了磷酸化修饰.